作者:hacker发布时间:2022-07-20分类:网络黑客浏览:127评论:3
有核定位信号的进细胞核,有线粒体或叶绿体前导肽的分别进入线粒体和叶绿体,有内质网驻留信号的在内质网,有M6P信号的在溶酶体,有信号肽的可能是分泌蛋白或者膜蛋白,膜蛋白定位在膜上,分泌蛋白出细胞,高尔基体的我忘了
证实两个蛋白在细胞膜上都有定位有许多种方法:
1,荧光报告基因:两个蛋白各自用荧光蛋白标记,比如GFP和RFP等,两者荧光光谱不可重叠,在共聚焦显微镜下在各自通道观察和merge后的图像分析,可见荧光重叠,即可证明共定位。
2,免疫荧光:要求两个蛋白都有抗体,或者带有不同的标签,如myc,flag等,然后用免疫组织化学的方法,做免疫荧光二抗双标,在共聚焦显微镜下,可以看到荧光共定位。
3,免疫电镜,同免疫荧光类似,二抗要用不同大小的胶体金标记的二抗,电镜下可以分辨是否共定位。
4,western:提取质膜后,用相应的抗体检测是否在质膜组分中可以同时检测到两种蛋白。
细胞器不同,相应的靶向蛋白的定位过程也不同。
真核细胞除叶绿体,线粒体能少量合成蛋白外,绝大部分蛋白是在胞浆或粗糙内质网合成,最终运送到不同地点,形成成熟蛋白并行使功能。译产物中很大一部分是以前体蛋白形式存在,往往有蛋白分子定位信号,可引导蛋白在胞内定位。
免疫组织化学、免疫荧光可以达到目的了。免疫组化可以看出蛋白在细胞核、细胞浆或细胞间质。如果要定位到比较大细胞器可能需要免疫荧光,用特异蛋白抗体和细胞器抗体共染;在特殊显微镜比如激光共聚焦显微镜应该是可以看到的。不知道你的探针法是什么探针,如果是RNA探针,达不到定位的效果,因为检测mRNA都是胞浆中。
已有3位网友发表了看法:
访客 评论于 2022-07-20 14:16:24 回复
较大细胞器可能需要免疫荧光,用特异蛋白抗体和细胞器抗体共染;在特殊显微镜比如激光共聚焦显微镜应该是可以看到的。不知道你的探针法是什么探针,如果是RNA探针,达不到定位的效
访客 评论于 2022-07-20 20:22:24 回复
目录:1、蛋白质在细胞内的定位2、如何证实细胞膜上两个蛋白的位置关系3、蛋白质在细胞中的定位机制是什么?4、蛋白质在细胞中的定位蛋白质在细胞内的定位有核定位信号的进细胞核,有线粒体
访客 评论于 2022-07-20 18:12:27 回复
共染;在特殊显微镜比如激光共聚焦显微镜应该是可以看到的。不知道你的探针法是什么探针,如果是RNA探针,达不到定位的效果,因为检测mRNA都是胞浆中。